Identifikace regulátorů genové exprese u Treponema pallidum.
| Autoři | |
|---|---|
| Rok publikování | 2005 |
| Druh | Článek ve sborníku |
| Konference | Sborník příspěvků IX. Pracovního setkání biochemiků a molekulárních biologů |
| Fakulta / Pracoviště MU | |
| Citace | |
| Obor | Genetika a molekulární biologie |
| Klíčová slova | Treponema pallidum ssp. pallidum; regulation of gene expression |
| Popis | Metodou real-time RT PCR jsme vyšetřili regulační funkci treponemálních genů rpoN (kódujícího sigma-54 faktor) a fhlA (kódujícího domnělý transkripční faktor). Tyto geny byly naklonovány do expresních plazmidů pBAD/HisB kompatibilních s replikačním systémem BAC. Exprese klonovaných genů byla regulována koncentrací arabinózy v kultivačním mediu. Vzniklé konstrukty obsahovaly izolovaně naklonované geny i plazmidy obsahující oba geny současně. Vyšetřili jsme růstovou křivku kmene DH10B s rekombinantními plazmidy za aerobních a semianaerobních podmínek Za neindukovaných aerobních podmínek roste kmen nesoucí konstrukt s oběma geny rpoN a fhlA výrazně pomaleji než ostatní vzorky. Po indukci arabinózou pozorujeme pomalejší růst u všech kmenů E. coli nesoucí geny rpoN a fhlA a také u kmene nesoucího konstrukt s oběma geny rpoN a fhlA. Protože T. pallidum nelze kultivovat v podmínkách in vitro, expresi treponemálních genů jsme monitorovali v 19 klonech BAC knihovny T. pallidum v E. coli DH10B. Konstrukty s geny rpoN a fhlA byly transformovány do E. coli DH10B s kosmidy DSTP147 a DSTP085. Z těchto kmenů byla izolována RNA 60 a 120 minut po indukci arabinózou a hladina transkriptů vyšetřena kvantitativní RT PCR. Nejvíce jsou regulovány geny TP 9 (tprA), TP 28 (předpovězený gen pro hemolysin), TP 30 (groEL), TP 1037 (hlyIII) a TP 1038 (TpF1). Regulační proteiny RpoN a FhlA přitom spolupracují na pozitivní regulaci transkripce těchto genů. |
| Související projekty: |