Random mutagenesis as a tool for improving properties of PA-IIL lectin from Pseudomonas aeruginosa
| Název česky | Náhodná mutageneze jako nástroj pro vylepšení vlastností lektinu PA-IIL z Pseudomonas aeruginosa |
|---|---|
| Autoři | |
| Rok publikování | 2010 |
| Druh | Konferenční abstrakty |
| Fakulta / Pracoviště MU | |
| Citace | |
| Popis | Náhodná mutageneze je nejužitečnější přístup v rámci řízené evoluce a je široce využívána v proteinovém inženýrství k produkci proteinů s pozměněnými anebo vylepšenými vlastnostmi. Náhodná mutageneze zahrnuje mnoho metod, které jsou používány pro přípravu rozsáhlých knihoven mutantů. Jednou z těchto metod je i error-prone PCR. Tato technika zavádí nukleotidové změny během PCR díky použití DNA polymerasy náchylné k chybám a mutačním reakčním podmínkám. LecB je cílový gen vybraný pro modifikaci pomocí náhodné mutageneze. Tento gen kóduje lektin PA-IIL z bakterie Pseudomonas aeruginosa. Tento lektin je velmi dobře charakterizovaný a je nesporné, že vykazuje neobvykle vysokou afinitu k monosacharidům široce se vyskytujícím jako terminální residua glykokonjugátů buněčného povrchu, které sou přítomné v mucinech pacientů s cystickou fibrosou. Náhodná mutageneze by mohla pomoci s vytvořením proteinu se zajímavě pozměněnými vlastnostmi vůči specifitě. Po několika pokusech s komerčními kity, které neposkytovaly očekávané procento mutovaných aminokyselin jsme zoptimalizovali reakční podmínky error-prone PCR abychom dostali vyhovující výsledky. Nakonec jsme získali účinnou metodu, která zavádí náhodné mutace do cílového genu v dostatečné míře. V současné době jsou optimalizovány metody pro high-throughput screening knihoven mutantů, aby byly nalezeni mutant se změněnou afinitou anebo specifitou. Mutované lektiny s vylepšenými vlastnostmi mohou být dale využity v biotechnologii a pro bioanalytické účely. |
| Související projekty: |