Quantitative proteomic analysis of lung carcinoma cell line transfected by mutant p53 gene sequences
| Název česky | Kvantitativní proteomová analýza buněčné linie plicního karcinomu transfekované mutantními sekvencemi proteinu p53 |
|---|---|
| Autoři | |
| Rok publikování | 2009 |
| Druh | Konferenční abstrakty |
| Fakulta / Pracoviště MU | |
| Citace | |
| Popis | V rámci této studie byla zavedena kvantitativní proteomická metoda na bázi LC-MS/MS pro komparativní protemovou analýzu buněčné linie plicního karcinomu H1299 transfekované dvěma mutantními sekvencemi proteinu p53(hot-spot mutatace v kodonech 175 a 273. Vlastní analytická metoda zahrnovala značení tryptických peptidů značkami iTRAQ 8-plex, separaci peptidů dvourozměrnou kapalinovou chromatografií (SCX and RP-LC) následovanou tandemovou hmotnostní spektrometrií na platformě MALDI-MS/MS (iTRAQ-2DLC-MS/MS). Základní cíle byly: (1) zjistit spektrum proteinů detekovatelné tímto přístupem, (2) kvantitativně srovnat proteomové profily buněk lišících se pouze danou mutací po učinku 17-(allylamino)-17-demethoxygeldanamycinu (17-AAG). Studie vedla k reprodukovatelné identifikaci 411 proteinů. Účinek 17-AAG na buňky nesoucí p53 R175H mutanta vedl k signifikantní indukci šesti heat-shock proteinů (Hsp90 alpha, Hsp71, Hsp70, Hsp60, HSPA5, 10 kDa heat shock protein) a ke snížení hladiny elongačního faktoru 2. Stejný účinek 17-AAG na buňky nesoucí mutanta p53 R273H vedl k velmi podobnému expresnímu profilu. Navíc byla zvýšena hladina Hsp71, zatímco hladiny vimentinu a histonu H2B type 1-N byly významně sníženy. Lze říci, že naše výsledky jsou v souladu s úlohou 17-AAG jako inhibitoru Hsp90. Ukázali jsme, že účinek 17-AAG je spojen s úlohou p53 v apoptóze a že dva mutanti p53 mají různý fenotypový projev na základě různé stability a konformace proteinu p53. Zde prezentovaný proteomický přístup bude dále doplněn komparativní analýzou na úrovni cDNA ke získání kompletního pohledu na studovaný biologický problém. |
| Související projekty: |