Sensitive Detection and Separation of Fluorescent Derivatives using Capillary Electrophoresis with Laser-Induced Fluorescence Detection with 532 nm Nd:YAG Laser
| Název česky | Citlivá detekce a separace fluoreskujících derivátů pomocí kapilární elektroforézy s laserem indukovanou fluorescenční detekcí s 532 nm laserem Nd: YAG |
|---|---|
| Autoři | |
| Rok publikování | 2006 |
| Druh | Článek v odborném periodiku |
| Časopis / Zdroj | Journal of Luminescence |
| Fakulta / Pracoviště MU | |
| Citace | |
| www | http://www.elsevier.com/wps/find/journaldescription.cws_home/505700/description?navopenmenu=-2 |
| Obor | Analytická chemie, separace |
| Klíčová slova | Electrophoresis; Fluorescence; Derivatization; RBITC; Proteins; Rhodamine; 532 nm Laser. |
| Popis | Metoda kapilární elektroforézy s laserem indukovanou fluorescenční detekcí je silným nástrojem pro separaci a citlivou detekci fluoreskujících látek. Mnohé biologicky aktivní látky, jako jsou například peptidy a proteiny mohou přirozeně fluoreskovat, ovšem nativní fluorescence je často nedostatečná a/nebo je nezbytné využít nákladný laser pro excitaci v UV oblasti záření. Výhodné řešení je potom derivatizovat látky pomocí fluoreskujících činidel exctitovatelných běžnými typy laserů a s vysokým kvantovým výtěžkem. V této práci byl laboratorně sestaven a s využitím rhodaminových barviv odladěn prototyp přístroje pro CELIF s diodově pumpovaným Nd:YAG excitačním laserem se stabilizací zpětnou vazbou a násobičem frekvence 2x (532 nm). Rozsah použití a účinnost tohoto laseru pro CELIF byly vyhodnoceny a otestovány mezi prvními. Detekční limit 2E-13 mol/l byl dosažen pro Rhodamin B, což je ve shodě s výsledky pro běžně používaný Ar-ion laser. Experimenty zahrnují příkladovou separaci a stanovení rhodaminových barviv. Isothiokyanát rhodaminu B byl použit pro derivatizaci aminokyselin, peptidů a malých proteinů za podmínek uváděných bežně pro obdobné činidlo na bázi fluoresceinu. Podmínky pro derivatizační reakci jako vhodné rozpouštědlo, pH, čas a teplota byly optimalizovány a je demonstrována optimalizovaná CELIF fluorescenčně značeného hovězího insulinu. |
| Související projekty: |