Využití avidin-biotinové technologie pro elektrochemickou detekci nukleových kyselin

Logo poskytovatele

Varování

Publikace nespadá pod Ekonomicko-správní fakultu, ale pod Přírodovědeckou fakultu. Oficiální stránka publikace je na webu muni.cz.
Autoři

MASAŘÍK Michal KIZEK René VACEK Jan TRNKOVÁ Libuše HAVEL Ladislav JELEN František

Rok publikování 2004
Druh Článek ve sborníku
Konference Sborník příspěvků VIII. pracovní setkání biochemiků a molekulárních biologů
Fakulta / Pracoviště MU

Přírodovědecká fakulta

Citace
Obor Elektrochemie
Klíčová slova Avidin-biotin technologa; nucleic acids; electrochemical detection of NA; carbon paste electrode; streptavidin
Popis Bakterie Streptomyces avidinii produkuje streptavidin (STV), který váže biotin ze svého okolí. STV je tetramer o čtyřech identických podjednotkách složených z osmi antiparalelních beta-skládaných listů STV je složen ze 159 aminokyselin (obsahuje 6 molekul tyrosinů a 6 tryptofanů). Nedávno jsme publikovali modifikaci uhlíkové pastové elektrody STV. Elektrodový systém se skládal z modifikované pastové uhlíkové pracovní elektrody (uhlík:minerální olej; STV), Ag/AgCl/3M KCl (referenční elektroda) a pomocné platinové elektrody. Množství uhlíku a minerálního oleje ovlivňuje elektrochemickou odpověď STV přítomného v pracovní elektrodě. Zjistili jsme, že maximální signál 10 mg/mL STV přítomného v pracovní elektrodě získáme při poměru 70/30 (uhlík/minerální olej). Elektrochemické měření technikou adsorptivní přenosové square wave voltametrie (AdT SWV) bylo provedeno v prostředí acetátového pufru. Studovali jsme vliv různých koncentrací (5 -500 ng/mL) STV přidaných do pastové elektrody. Zaznamenané výšky oxidačních signálů STV vykazovaly lineární závislost vyjádřenou rovnicí: y = 1.0043x + 9.0444 (R2 = 0.996). Limit detekce STV přítomného v pracovní elektrodě byl pod 5 ng/mL. Změnou výšek elektrochemických signálů STV bylo možné pozorovat vazbu STV s biotinem. Biotin vázající se na STV vede k rychlému poklesu oxidačního signálu STV. Tohoto jevu jsme využili k analýze nukleových kyselin značených biotinem. Analyzovaný vzorek biotinylované nukleové kyseliny byl adsorbován z 6 mL a elektroda omyta v 80% ethanolu (odmytí nespecificky vázané DNA). AdT SWV poskytovala tři oxidační signály. Kolem potenciálu 0.6 V byl sledován signál STV přítomného v elektrodě, kolem potenciálu 0.8 V byl pozorovatelný oxidační signál guaninu a kolem 1.0 V se objevuje oxidační signál adeninu. Studované elektrochemické signály STV, guaninu a adeninu se mění v závislosti na jejich koncentraci. Se vzrůstající koncentraci biotinylem značené nukleové kyselin signál STV klesá a signály guaninu a adeninu vzrůstají. Nejnižší detekované koncentrace biotinylované nukleové kyseliny se pohybovaly kolem 5 mg/mL.
Související projekty:

Používáte starou verzi internetového prohlížeče. Doporučujeme aktualizovat Váš prohlížeč na nejnovější verzi.