Stanovení glutathion-S-transferasy na pevných elektrodách
| Autoři | |
|---|---|
| Rok publikování | 2002 |
| Druh | Článek ve sborníku |
| Konference | Sborník abstrakt III. pracovního setkání fyzikálních chemiků a elektrochemiků v Brně |
| Fakulta / Pracoviště MU | |
| Citace | |
| Obor | Elektrochemie |
| Klíčová slova | glutathion-S-transferasa;pevné elektrody;adsorptivní přenosová diferenční pulzní voltametrie;katalytické procesy bílkovin |
| Popis | Glutathion-S-transferasy (EC 2.5.1.18 - GST) tvoří rodinu enzymů, které katalyzují připojení tripeptidu glutathionu (g-glutamylcysteinyl-glycin) k endogenním a exogenním substrátům. Cílem práce je nalézt biosenzor v podobě pevné elektrody, který by byl schopen GST detekovat v moči.GST (25 kDa) protein pocházející z Schizosotoma japonicum byl purifikován afinitní chromatografií (FPLC Pharmacia)a elektrochemicky byl nalyzován na přístroji AUTOLAB ve spojení s VA-Stand 663. Elektrodový systém se skládal z pracovní elektrody - pastová uhlíková (poměr uhlík:minerální olej; 70:30 (w%), PGE (pyrolytická grafitová elektroda) a nebo HMDE (visící rtuťová kapková elektroda, z referenční elektrody Ag/AgCl/3M KCl a pomocné platinové elektrody. Při adsorptivní přenosové diferenční pulsní voltametrii (AdT DPV) se GST adsorbovalo na pracovní elektrodě ze 6 mL vzorku. Voltametrická měření byla provedena v prostředí acetátového pufru (pH 5.0). Uhlíkové elektrody poskytují velmi dobře reprodukovatelné oxidační signály tryptofanu a tyrosinu, na HMDE byly pozorovány katalytické signály GST (pík H nebo signál v Brdičkově reakci). Koncentrační závislost GST byla v rozsahu 5 mg/mL - 100 mg/mL vykazovala lineární průběh. |
| Související projekty: |