Molekulární mechanismy metastazování u low-grade karcinomů prsu: Od proteomického profilování k funkční charakterizaci
| Authors | |
|---|---|
| Year of publication | 2012 |
| MU Faculty or unit | |
| Citation | |
| Description | V první fázi projektu jsme se zaměřili na vyhledávání prometastatických cílů v souboru 96 charakterizovaných nádorů prsu zahrnujícího stratifikaci vzorků podle grade, exprese hormonálních receptorů a stavu lymfatických uzlin. Primární proteomická studie byla založena na metodice zahrnující štěpení komplexních lyzátů trypsinem, značení peptidů isobarickými značkami (iTRAQ), separaci peptidů dvourozměrnou kapalinovou chromatografií a identifikaci a kvantifikaci proteinů na bázi vysokorozlišovací hmotnostní spektrometrie (iTRAQ-2DLC-MS/MS). Soubor 95 vybraných genů pak byl profilován na transkriptové úrovni. Statistika zahrnující Spearmanovu korelaci odhalila dva klastry související se stavem lymfatických uzlin u low garde karcinomů. Sada proteinů, změny jejichž exprese byly potvrzeny na proteinové i transkriptové úrpovni, byla dále validována pomocí imunohostochemie. Naše výsledky potvrzují, že molekulární mechanismy metastazování u low-grade karcinomů prsu zahrnují aktivaci proteolýzy, NF-kappaB dráhy, změny v cytoskeletálních a adhezních proteinech a liší se od mechanismů u high-grade karcinomů. V další fázi výzkumného programu se zaměřujeme na funkční charakterizaci identifikovaných proteinů zejména ve vztahu k buněčné migraci. Exprese cytoskeletálního aktin vážícího souboru transgelinu byla umlčena v buněčné linii BT549 pomocí siRNA, což výrazně snížilo migrační vlastnosti buněk. Analýza protein-protein interakcí pomocí proteomického přístupu odhalila cathepsin D, marker špatné prognózy u karcinomu prsu, jako jeden ze silných interakčních partnerů transgelinu. Rovněž byla studována role methylace promotoru v regulaci genové exprese transgelinu. Zjištěné výsledky poukazují na významnou úlohu transgelinu v metastazování nádorů karcinomu prsu. Práce byla podporována projektem Grantové agentury České republiky č. P304/10/0868 a Evropským fondem pro regionální rozvoj a státním rozpočtem České republiky (RECAMO, CZ.1.05/2.1.00/03.0101). |
| Related projects: |