In vivo fluorescent tracking system of coupled transcription-translation
| Název česky | In vivo fluorescenční sledovací systém sprazene transkripce-translace |
|---|---|
| Autoři | |
| Rok publikování | 2021 |
| Druh | Konferenční abstrakty |
| Fakulta / Pracoviště MU | |
| Citace | |
| Popis | Bakteriální buněčný prostor není rozdělen na sekce membránou, takže ribozomy mohou iniciovat translaci na nascentní mRNA, která je stále transkribována RNA polymerázou (RNAP). Výskyt sdružené transkripce-translace (CTT) u bakterií je široce přijímán díky in vitro strukturám popisujícím CTT komplexy. Chybí však jakýkoli in vivo důkaz CTT v bakteriálních buňkách využívajících přístupy zobrazování živých buněk. Nedávné in vivo jednočásticové fluorescenční studie zaměřené na prostorovou organizaci nukleoidů v E. coli zkoumají lokalizaci RNAP a ribozomů odděleně v buňce. Navíc téměř všechny fluorescenčně značené ribozomální proteiny v těchto studiích hrají kritickou roli v CTT (podle struktur in vitro), což znemožňuje sledovat plně sestavené CTT. Zde představujeme návrh in vivo fluorescenčního systému pro monitorování CTT v E. coli. Pro značení byly vybrány beta prime protein z RNAP, ribozomální proteiny S20 a S16 z malé ribozomální podjednotky 30S a L9 a L17 z velké ribozomální podjednotky 50S, protože neinterferují s CTT. Několik sad bakteriálních kmenů bylo připraveno s fúzovanými cílovými proteiny a fluorescenčními proteiny (mCerulean, mVenus, mRFP1) rekombinací lamba-Red v jejich endogenních lokusech. Konfokální mikroskopie v kombinaci s fluorescenční mikroskopií s vysokým rozlišením se bude používat k pozorování dynamiky tohoto komplexního systému v jedné buňce. Díky zapojení CTT do stresové reakce bude sledována migrace ribozomálních podjednotek a RNAP spolu s výskytem CTT v různých stresových podmínkách (tepelný nebo studený šok, oxidační stres atd.) |
| Související projekty: |