Electrochemical determination of glutathion-S-transferase as a marker of proximal tubuls damage
| Authors | |
|---|---|
| Year of publication | 2003 |
| Type | Article in Proceedings |
| Conference | Sborník příspěvků, VII.pracovní setkání biochemiků a molekulárních biologů |
| MU Faculty or unit | |
| Citation | |
| Field | Electrochemistry |
| Keywords | Electrochemistry and HPLC of glutathion-S-transferase;catalytic hydrogen evolution;Brdicka reaction |
| Description | Poruchy metabolismu a výživy, představující jeden z klíčových problémů současné medicíny, způsobují celou řadu civilizačních onemocnění, mezi něž patří i poškození ledvin. V nedávné době bylo ukázáno, že pro přímou detekci poškození proximálních ledvinových tubulů by mohla být vhodným markerem glutathion-S-transferasa. Glutathion-S-transferasa (EC 2.5.1.18 - GST) patří do velké rodiny enzymů, které katalyzují připojení tripeptidu glutathionu (g-glutamylcysteinyl-glycin) k endogenním nebo exogenním substrátům. Glutathion připojený k hydrofobním a elektrofilním sloučeninám vytváří adukty s vyšší rozpustností ve vodě, které mohou být enzymaticky degradovány na soli merkapturových kyselin a vylučovány z organismu močí. Z hlediska renálního poškození je třeba ze čtyř tříd GST (a-GST, m-GST, p-GST a t-GST) sledovat hladinu a-GST, jejíž vzestup indikuje toto poškození. To znamená, že stanovení koncentrace a-GST v moči je senzitivní metoda pro diagnostiku renálního poškození. Bylo zjištěno, že chromatografické stanovení GST v moči není ovlivněno lékem ani změnou pH, což je pozitivním faktem pro sledování renálních funkcí u chronického ledvinového onemocnění nebo reakce ledvin po jejich transplantaci. Vedle stanovení koncentrace GST v moči pomocí HPLC byla vyzkoušena elektrochemická metoda - diferenční pulsní voltametrie doplněná technikou adsorptivního přenosu (AdT DPV). Při této technice byla GST adsorbována na různých pracovních elektrodách z malého množství pufrovaného roztoku. Registrované elektrochemické GST odezvy byly na různých pracovních elektrodách porovnávány. Bylo zjištěno, že uhlíkové elektrody poskytují velmi dobře reprodukovatelné oxidační signály tryptofanu (Trp) a tyrosinu (Tyr). Na rtuťové elektrodě (HMDE) byly pozorovány dva typy katalytických signálů GST, jednak pík H a pík odpovídající Brdičkově reakci. Na uhlíkové elektrodě byla studována závislost výšky oxidačních signálů na době akumulace a na koncentraci GST. Dá se předpokládat, že elektrochemické metody se mohou stát velmi užitečným prostředkem pro přímé stanovení GST v biologickém materiálu. |
| Related projects: |